技术背景

不管是基础研究还是医学研究，特定样本中特定蛋白质的表达情况可为研究者提供丰富的生物学信息。如临床样品中疾病特异性 Biomarker 的检测定量可作为疾病诊断、病患分型及疗效评估的重要参考依据；药物筛选活动中，也常常通过药物靶标及其下游通路蛋白的表达量或修饰状态来评估潜在的药效，如著名的的抗白血病药物 Gleevec（格列卫）即以酪氨酸激酶为作用靶标。

特定蛋白质的检测定量常常基于免疫学手段，如 Elisa、luminex、免疫组化、Western Blot 等等。前三项技术直接以原始样品进行检测，靶标蛋白与样品杂蛋白无分离步骤，由于生物学样品的复杂性及抗体质量导致的非特异性结合，常常产生假阳性信号而无法识别剔除。而 Western Blot 技术采取先分离后检测的策略，不仅能将靶标蛋白定量，同时具备根据分子量信息进行靶标「鉴定」的优点。因此，即使由于样品复杂性及抗体质量导致非特异信号，我们仍然可以根据分子量信息将真正的靶标进行检测定量。翻翻生物学杂志，不难发现几乎每一篇文献均有 Western Blot 这一经典而强大的技术身影。但是，传统的基于凝胶的 Western Blot 也存在两方面的问题，一定程度上限制了其应用：

1. 步骤繁多、耗时过长：需经历制胶、电泳、转膜、封闭、一抗、洗涤、二抗、洗涤、发光等繁琐步骤，且需手工操作，耗时 1-3 天，不仅给实验者带来沉重的身心负担，结果的重复性及重现性也很难确保。

2. 大分子量蛋白检测困难：传统凝胶 Western Blot 检测中小分子量蛋白比较适合，而面对超过 150 KD 的大分子量蛋白常常倍感压力。第一，由于分子量较大，常常采用低浓度凝胶。这种凝胶柔软易裂，需要极其轻柔小心的操作，但并非所有实验室都有条件配备小师妹这种重要的战略资源。第二，转膜效率低，并且不稳定。花费大量的时间精力摸索转膜时间、缓冲液配方及电压电流，显影时却常常得到微弱、灰度不均一的条带图谱，无法进行稳定准确的定量。

3.灵敏度较低。

技术原理

基于全自动定量Western系统--Protein Simple Wes的蛋白定量检测

服务优点

准确、重复性好：全自动化操作，最高程度降低人工误差；CV值通常不超过10%。

图片美观：检测完成后可自动给出对应样本的分析数据，包括名称、目标蛋白的分子量、峰面积、浓度、信噪比等。

上样量低：只需3-5ul的样本量。灵敏：灵敏度高，可低至pg级。

大分子量蛋白检测不费力：由于不需要转膜，可以检测最大至440 KD大分子量蛋白。

1、无需繁琐、混乱的制胶、跑胶过程，减少操作程序，避免污染

2、无需转膜，减少实验步骤，避免样品损失，提高结果的准确率和重复率

3、自动加样

4、根据蛋白样品的分子量大小自动进行分离

5、采用先进技术进行蛋白质捕获及固定

6、自动进行一抗、二抗孵育

7、自动进行免疫和化学发光检测步骤

8、完全无需人工干预，避免实验过程中的人为误差

9、可同时运行12个独立样品

10、单个样品上样量为~3ug，上样体积约3ul

11、一次运行时间3-5个小时

12、结果具有高度重复性，CV≤10%

14、系统自动完成数据采集过程

15、软件可对结果自动进行精确的定量分析

16、软件设计独特，用户可定义样品，设置检验流程和分析运行数据

17、可置于工作台面上，方便操作

实验参数